基因克隆的方法主要有哪几种?简述各种方法的原理和用途。
1、PCR扩增克隆法是在已知植物基因序列的基础上，进行基因序列克隆的一种方法。先从基因文库（genebank）中找到有关基因序列，据此合成一对寡聚核苷酸引物，从植物中提取染色体DNA或RNA，进行PCR扩增。
2、EASY克隆 EASY克隆的方法主要依赖于载体上所携带的拓扑异构酶。
3、这也是基因克隆的一种较直接的方法。首先将探针作放射性或非放射性标记，再将其与用不同内切酶处理的基因组DNA杂交，最后将所识别的片段从胶中切下来，克隆到特定的载体（质粒、噬菌体或病毒）中作序列测定或功能分析。
从生物体克隆目的基因的方法有哪些?
应用cDNA差示分析法克隆基因 基本原理：该法充分发挥了PCR技术以指数形式扩增双链DNA模板的特性，通过降低cDNA群体复杂性和更换cDNA两端接头等方法，特异性扩增目的基因片段。
获取目的基因的方法主要有基因组文库法、cDNA的克隆、反转录法、人工合成法等。从基因文库中获取这个没什么就是现成的基因储存在受体菌上你用的时候提取出来就好了基因组文库法就是原教材中的用限制性内切酶直接获取。
其基本原理包括： 提取目标基因：首先从目标生物体中提取需要克隆的基因，通常采用PCR或限制性酶切等方法来从基因组DNA中放大或切割出目标基因。
图位克隆的方法、过程及优缺点
1、用获得阳性克隆构建目的基因区域的跨叠群；6）通过染色体步行、登陆或跳跃获得含有目标基因的大片段克隆；7）通过亚克隆获得带有目的基因的小片段克隆；8）通过遗传转化和功能互补验证最终确定目标基因的碱基序列，步骤见图4-10。
2、图位克隆法（Map-based cloning）是新型分离和克隆植物基因的方法之一，在不知道基因的表达产物 ，在未知基因的功能信息又无适宜的相对表型用于表型克隆时，最常用的基因克隆技术就是图位克隆法。
3、用反向遗传学途径克隆抗病基因，应用最多的有两种技术，即转座子标记法和图位克隆法。利用转座子标记法时，目的基因最好是显性单基因，其表型特征明显，得以准确快速地筛选到抗病突变体。
4、【答案】：染色体步移（步查）是图位克隆中寻找感兴趣基因或DNA片段所在位置的研究方法。
5、弊：克隆技术导致的基因复制，会威胁基因多样性的保持，生物的演化将出现一个逆向的颠倒过程，即由复杂走向简单，这对生物的生存是极为不利的。
